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血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳原理和操作

作者:澳门赌场下载发布时间:2017-10-16 09:48浏览:

[原理] 血清脂蛋白经饱和乙酰苏丹黑B染色后,以琼脂糖凝胶为载体,在pH8.6巴比妥缓冲液中电泳分离,各种脂蛋白将分成不同区带。

[器材]

1.玻片

2.水平式电泳仪

[试剂]

1.0.5%琼脂糖(Agarose)溶液:称取0.5g琼脂糖,加巴比妥缓冲液100ml,盛于三角烧杯中,置沸水浴中煮沸溶解,备用。

2.新鲜血清(无溶血)

3.pH8.6、I=0.075 巴比妥缓冲液:称取15.4g巴比妥钠,2.76g巴比妥,0.292gEDTA,以水溶解后加至100ml,调pH至8.6,4℃保存。

4.苏丹黑B染色液:苏丹黑B 100mg,异丙醇10ml,混合。置37℃水浴使之充分溶解后,离心取上清液置室温备用。

[操作]

1. 制板

配制0.5%的琼脂糖或预先配好置4℃冰箱,用时置沸水溶解,再冷却到50℃~60℃,取约4ml琼脂糖迅速铺在玻璃片上,然后放上开槽器(注意:①开槽放在中央,距一侧1.5cm处;②避免产生气泡),静置室温待凝固,把开槽器小心取下,样品槽即制成。

2. 加样

取预染血清20ml加入样品槽 (预染血清:血清0.2ml + 苏丹黑B染色液0.02ml)

3. 电泳

将载有琼脂糖凝胶玻片(已加血清样品)放在电泳槽中,槽内倒入巴比妥缓冲液,用四层纱布搭板,加样端接负极,电压120V,待最前端区带泳动至玻片2/3处时可终止电泳,观察实验结果。

[参考值]

正常人血清脂蛋白可分出三条区带:

b脂蛋白(占55%,着色最深)

前b脂蛋白(占15%,着色最浅)

a脂蛋白(占30~40%,着色居中)

在原点处应无乳糜微粒可见